Антитела к бронхиту кур в ифа
ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÓÊÀÇÀÍÈß
äëÿ âûÿâëåíèÿ àíòèòåë ê âèðóñó
èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà êóð
èììóíîôåðìåíòíûì àíàëèçîì
1. ÎÁÙÈÅ ÏÎËÎÆÅÍÈß
2. ÏÎÐßÄÎÊ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈß
3. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÊÎÍÏÎÍÅÍÒÎÂ ÍÀÁÎÐÀ È ÎÁÎÐÓÄÎÂÀÍÈß ÄËß ÏÐÎÂÅÄÅÍÈß ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÉ
4. ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÈÌÌÍÓÍÎÔÅÐÌÅÍÒÍÎÃÎ ÀÍÀËÈÇÀ
5. Ó×ÅÒ ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠÐÅÀÊÖÈÈ
6. ÎÖÅÍÊÀ ÐÅÇÓËÜÒÀÒÎÂ ÐÅÀÊÖÈÈ
ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂÎ
ÑÅËÜÑÊÎÃÎ ÕÎÇßÉÑÒÂÀ ÓÒÂÅÐÆÄÀÞ
ÐÎÑÑÈÉÑÊÎÉ ÔÅÄÅÐÀÖÈÈ Çàì.íà÷àëüíèêà
Äåïàðòàìåíòà âåòåðèíàðèè
ÃËÀÂÍÎÅ ÓÏÐÀÂËÅÍÈÅ ÂÅÒÅÐÈÍÀÐÈÈ
N 13-7-2/1222 27 àïðåëÿ 1998 ã.
ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÓÊÀÇÀÍÈß
äëÿ âûÿâëåíèÿ àíòèòåë ê âèðó-
ñó èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà êóð
èììóíîôåðìåíòíûì àíàëèçîì
1. ÎÁÙÈÅ ÏÎËÎÆÅÍÈß
1.1. Ñïåöèôè÷åñêèå àíòèòåëà ê âèðóñó èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà
êóð (ÈÁÊ) âûÿâëÿþò â ñûâîðîòêàõ êðîâè ñ ïîìîùüþ íàáîðà
êîìïîíåíòîâ èììóíîôåðìåíòíûì àíàëèçîì (ÈÔÀ). Äëÿ ðåòðîñïåêòèâíîé
äèàãíîñòèêè áîëåçíè ó íåâàêöèíèðîâàííîãî ïòèöåïîãîëîâüÿ è
êîíòðîëÿ íàïðÿæåííîñòè ïîñòâàêöèíàëüíîãî èììóíèòåòà.
1.2. Â ñîñòàâ íàáîðà âõîäÿò:
— Êîìïîíåíò N1 (Ê1) — ïîëîæèòåëüíàÿ ñûâîðîòêà êðîâè êóð ê
âèðóñó ÈÁÊ (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü), ðàçâåäåííàÿ 1:100,
ëèîôèëèçèðîâàííàÿ, 1,0 ñìÇ — 1 àìïóëà (ôëàêîí);
— Êîìïîíåíò N2 (Ê2) — îòðèöàòåëüíàÿ ñûâîðîòêà êðîâè êóð
(îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü), íå ñîäåðæàùàÿ àíòèòåë ê âèðóñó ÈÁÊ,
ðàçâåäåííàÿ 1:100, ëèîôèëèçèðîâàííàÿ, 1,0 ñì3 — 1 àìïóëà (ôëàêîí);
— Êîìïîíåíò N3 (Ê3) — î÷èùåííûé àíòèãåí âèðóñà ÈÁÊ,
àäñîðáèðîâàííûé ïî î,1 ñì3 â ëóíêàõ ïëàíøåòà äëÿ ÈÔÀ-2 ïëàíøåòà;
— Êîìïîíåíò N4 (Ê4) — àíòèâèäîâîé èììóíîïèðîêñèäàçíûé
êîíüþãàò ïðîòèâ èììóíîãëîáóëèíîâ êóð, ëèîôèëèçèðîâàííûé, 0,2 èëè
0,5 ñìÇ — 1 àìïóëà (ôëàêîí);
— Êîìïîíåíò N5 (Ê5.1,; Ê5.2.; Ê5.3.) — íàáîð ñîëåé äëÿ
ïðèãîòîâëåíèÿ áóôåðíîãî ðàñòâîðà; õëîðèä íàòðèÿ (NaCl) — 8,76 ã
— 1 ôëàêîí; íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåøåííûé (Nà2 HPO4 õ 12
H2 O) — 3, 58 ã — 1 ôëàêîí; êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåøåííûé
(ÊÍ2 ÐÎ4) — 1,36 ã — 1 ôëàêîí. Êàæäàÿ ñîëü ôàñóåòñÿ â îòäåëüíûé
ôëàêîí.
— Êîìïîíåíò N6 (Ê6) — äåòåðãåíò òâèí-20 èëè òðèòîí Õ-100,
0,5 ñì3 — 1 ïðîáèðêà,
— êîìïîíåíò N7 (Ê7) — 5-àìèíîñàëèöèëîâàÿ êèñëîòà, ïîðîøîê,
ïî 20 ìã — 2 ïðîáèðêè;
— Êîìïîíåíò N8 (Ê8) — ãèäðîïåðèò — 0,5 ã òàáëåòêà â óïàêîâêå — 1 øò.
1.3. Ïî âíåøíåìó âèäó ïîëîæèòåëüíàÿ è îòðèöàòåëüíàÿ
ñûâîðîòêè êðîâè êóð ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ñóõóþ ãîìîãåííóþ ïîðèñòóþ
ìàññó áåëîãî öâåòà, ðàñôàñîâàíû â àìïóëû (ôëàêîíû) ïîä âàêóóìîì
èëè ïîä èíåðòíûì ãàçîì — àçîòîì.
1.4. Íà àìïóëû èëè ôëàêîíû ñ èììóíîñïåöèôè÷åñêèìè
êîìïîíåíòàìè íàêëåèâàþò ýòèêåòêè ñ óêàçàíèåì íàèìåíîâàíèÿ
ïðåïàðàòà, îáúåìà â àìïóëå, ôëàêîíå èëè ïðîáèðêå â ñì3,
ðàáî÷åãî ðàçâåäåíèÿ, íîìåðà ñåðèè, íîìåðà êîíòðîëÿ, ñðîêà
ãîäíîñòè.
Íà ôëàêîíû, ïðîáèðêè äëÿ ìèêðîïðîá ñ íåñïåöèôè÷åñêèìè
êîìïîíåíòàìè íàêëåèâàþò ýòèêåòêè, íà êîòîðûõ óêàçûâàþò
íàèìåíîâàíèå êîìïîíåíòîâ, èõ êîëè÷åñòâî â ñì3 èëè ìã.
1.5. Àìïóëû è ôëàêîíû óïàêîâûâàþò â êàðòîííûå êîðîáêè ñ
íàëè÷èåì ãíåçä èëè ïåðåãîðîäîê, îáåñïå÷èâàþùèõ íåïîäâèæíîñòü
àìïóë è öåëîñòíîñòü ïðåïàðàòà.
Íà êàæäóþ êîðîáêó ñ íàáîðîì íàêëåèâàþò ýòèêåòêó, íà êîòîðîé
óêàçûâàþò íàèìåíîâàíèå ïðåäïðèÿòèÿ-èçãîòîâèòåëÿ è åãî òîâàðíûé
çíàê, ïîëíîå íàçâàíèå íàáîðà, íîìåð ñåðèè, íîìåð êîíòðîëÿ,
íàçâàíèå è êîëè÷åñòâî àìïóë (ôëàêîíîâ, ïðîáèðîê) êàæäîãî
êîìïîíåíòà, âõîäÿùåãî â íàáîð, îáúåì êîìïîíåíòà â îäíîé àìïóëå
(ôëàêîíå, ïðîáèðêå), äàòó èçãîòîâëåíèÿ (ìåñÿö, ãîä), ñðîê
ãîäíîñòè, óñëîâèÿ õðàíåíèÿ è îáîçíà÷åíèå ÒÓ.
2. ÏÎÐßÄÎÊ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈß
2.1. Äëÿ èññëåäîâàíèÿ â ëàáîðàòîðèþ äîñòàâëÿþò ñûâîðîòêó
êðîâè êóð îò 20-25 ãîëîâ (ïî 0,2-0,3 ñì3) èç ïòèöåõîçÿéñòâ, ãäå
èìååòñÿ ïîäîçðåíèå íà äàííîå çàáîëåâàíèå. Ðåêîìåíäóåòñÿ
ïðîâîäèòü äîñòàâêó ïàðíûõ ïðîá ñûâîðîòêè êðîâè, âçÿòîé â íà÷àëå
çàáîëåâàíèÿ è ïîâòîðíî ÷åðåç 10-14 äíåé. Îòîáðàííûå ïðîáû õðàíÿò
â ìîðîçèëüíîé êàìåðå áûòîâîãî õîëîäèëüíèêà è äîñòàâëÿþò
îäíîâðåìåííî.
2.2. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ íàïðÿæåííîñòè ïîñòâàêöèíàëüíîãî
èììóíèòåòà â ëàáîðàòîðèþ äîñòàâëÿþò ñûâîðîòêè êðîâè îò
âàêöèíèðîâàííîãî ïòèöåïîãîëîâüÿ ñïóñòÿ 3-4 íåäåëè ïîñëå
ïðèìåíåíèÿ âàêöèíû ïðîòèâ èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà êóð.
3. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÊÎÍÏÎÍÅÍÒÎÂ ÍÀÁÎÐÀ È ÎÁÎÐÓÄÎÂÀÍÈß
ÄËß ÏÐÎÂÅÄÅÍÈß ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÉ
3.1. Äëÿ ïîñòàíîâêè ÈÔÀ èñïîëüçóþò îäíî- è âîñüìèêàíàëüíûå
àâòîìàòè÷åñêèå ïèïåòêè ñî ñìåííûìè íàêîíå÷íèêàìè ðàçíûõ îáúåìîâ,
òåðìîñòàò ñ òåìïåðàòóðîé íàãðåâà 37+-0,5Ñ, áûòîâîé
õîëîäèëüíèê, PH-ìåòð (òèï 121 èëè 340), ïðîìûâàþùåå óñòðîéòâî
ðó÷íîå èëè ïîëóàâòîìàòè÷åñêîå, ñïåêòðîôîòîìåòð ñ âåðòèêàëüíûì
ëó÷îì èëè ïîëíûé êîìïëåêò îáîðóäîâàíèÿ äëÿ ÈÔÀ.
3.2. Ïåðåä ïðèãîòîâëåíèåì ðàáî÷èõ ðàñòâîðîâ íàáîð ñ
êîìïîíåíòàìè âûäåðæèâàþò 30 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå
(18-20°Ñ).
Ïðèãîòîâëåíèå ðàñòâîðîâ
3.3. Ðàñòâîð N1 — 0,01 Ì ôîñôàòíî-áóôåðíûé ðàñòâîð ñ
0,15 Ì õëîðèäîì íàòðèÿ pH 7,2-7,4 è òâèíîì-20 èëè òðèòîíîì Õ-100
äî êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèè 0,05%. Äëÿ åãî ïðèãîòîâëåíèÿ èç íàáîðà
áåðóò ôëàêîí ñ êîìïîíåíòîì 5,1 (õëîðèä íàòðèÿ), ñîäåðæèìîå
êîòîðîãî âíîñÿò â ìåðíóþ êîëáó íà 1000 ñì3, ðàñòâîðÿþò
äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è äîâîäÿò îáúåì äî ìåòêè, ïîëó÷àÿ 0,15 Ì
ðàñòâîð õëîðèäà íàòðèÿ. Çàòåì îòäåëüíî íà ôèçèîëîãè÷åñêîì
ðàñòâîðå (î,85%-íûé ðàñòâîð õëîðèäà íàòðèÿ) ãîòîâÿò ðàñòâîðû «À»,
«Á».
Ðàñòâîð «À». Èç íàáîðà áåðóò ôëàêîí ñ êîìïîíåíòîì 5.2.
(íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåøåííûé), ñîäåðæèìîå êîòîðîãî âíîñÿò
â ìåðíóþ êîëáó âìåñòèìîñòüþ 100 ñì3 è ðàñòâîðÿþò ôèçèîëîãè÷åñêèì
ðàñòâîðîì. Äëÿ áûñòðîãî ðàñòâîðåíèÿ íàâåñêè ñîëè — ñîäåðæèìîãî
ìåðíîé êîëáû — ðåêîìåíäóåòñÿ ïîäîãðåòü è îáüåì äîâåñòè äî ìåòêè
ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì.
Ðàñòâîð «Á», ãîòîâÿò ïóòåì ðàñòâîðåíèÿ ñîäåðæèìîãî ôëàêîíà —
êîìïîíåíòà 5, 3. (êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåøåííûé) â
ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå è äîâîäÿò äî 100 ñì3 â ìåðíîé êîëáå.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ î,01 Ì ôîñôàòíî-áóôåðíîãî ðàñòâîðà ñ
0,15 Ì õëîðèäîì íàòðèÿ pH 7,2-7,4 (ÔÁÐ) ïðîâîäÿò ñìåøèâàíèå
ðàñòâîðîâ «À» è «Á» â ìåðíîé êîëáå îáúåìîì 1000 ñì3 â
ñëåäóþùèõ ñîîòíîøåíèÿõ: ðàñòâîð «À» — 85,0 ñì3 ðàñòâîð «Á» —
28,0 ñì3 è äîâîäÿò äî ìåòêè çàðàíåå ïðèãîòîâëåííûì 0,15 Ì
ðàñòâîðîì õëîðèäà íàòðèÿ, çàòåì çàìåðÿþò çíà÷åíèå ðÍ, êîòîðîå
äîëæíî áûòü â ïðåäåëàõ 7,2-7,4. Åñëè pH íèæå óêàçàííîãî óðîâíÿ,
äîáàâëÿþò íåîáõîäèìîå êîëè÷åñòâî ðàñòâîðà «À», åñëè âûøå —
ðàñòâîðà «Á».
Ïîñëå ïðèãîòîâëåíèÿ ÔÁÐ pH 7,2-7,4 â ýòîò ðàñòâîð âíîñÿò
ñîäåðæèìîå ïðîáèðêè — êîìïîíåíò 6 (òâèí-20), ïîëó÷àÿ êîíå÷íóþ
êîíöåíòðàöèþ äåòåðãåíòà 0,05%.
Äàííûé ðàñòâîð èñïîëüçóþò äëÿ ðàçâåäåíèÿ ïîëîæèòåëüíîé,
îòðèöàòåëüíîé, èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòêè êðîâè êóð,
àíòèâèäîâîãî êîíúþãàòà, ïðîìûâêè ëóíîê ïëàíøåòà. Õðàíÿò íå áîëåå
20 ñóòîê â áûòîâîì õîëîäèëüíèêå (òåìïåðàòóðà íå âûøå 4° Ñ).
3.4. Ðàñòâîð N2 — ñîäåðæèìîå àìïóëû — êîìïîíåíò 1
(ïîëîæèòåëüíàÿ ñûâîðîòêà êðîâè êóð) ðàñòâîðÿþò â 2,0 ñì3
ðàñòâîðà N1, ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå ïîëîæèòåëüíîé ñûâîðîòêè 1:200.
Ãîòîâÿò ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì. Äîïóñêàåòñÿ õðàíåíèå â ìîðîçèëüíîé
êàìåðå áûòîâîãî õîëîäèëüíèêà äî 15 ñóòîê.
3.5. Ðàñòâîð N3 — ñîäåðæèìîå àìïóëû — êîìïîíåíò 2 (îòðè-
öàòåëüíàÿ ñûâîðîòêà êðîâè êóð) ðàñòâîðÿþò â 2,0 ñì3 ðàñòâîðà
N1, ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå îòðèöàòåëüíîé ñûâîðîòêè 1:200. Ãîòîâÿò
ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì. Äîïóñêàåòñÿ õðàíåíèå â ìîðîçèëüíîé
êàìåðå áûòîâîãî õîëîäèëüíèêà äî 15 ñóòîê.
3.6. ðàñòâîð N4 — ñîäåðæèìîå àìïóëû — êîìïîíåíò 4 (àíòè-
âèäîâîé êîíúþãàò) ðàñòâîðÿþò â 21 ñì 3 ðàñòâîðà N 1. Ãîòîâÿò
ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì. Äîïóñêàåòñÿ õðàíåíèå â ìîðîçèëüíîé êàìåðå
áûòîâîãî õîëîäèëüíèêà äî 15 ñóòîê,
3.7. Ðàñòâîð N5 — òàáëåòêó ãèäðîïåðèòà (êîìïîíåíò 8)
ðàñòâîðÿþò â 15 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû, ðàñòâîð õðàíÿò â
çàùèùåííîì îò ñâåòà ìåñòå ïðè 4-8 C íå áîëåå 15 ñóòîê.
3.8. Ðàñòâîð N6 ñóáñòðàòíî-èíäèêàòîðíàÿ ñìåñü, ñîäåðæèìîå
ôëàêîíà — êîìïîíåíò 7 (5-àìèíîñàëèöèëîâàÿ êèñëîòà) ðàñòâîðÿ-
þò â êîëáå â 21 ñì3 ïîäîãðåòîé äî 50-60 Ñ äèñòèëëèðîâàííîé
âîäû, ïåðåìåøèâàþò äî ïîëíîãî ðàñòâîðåíèÿ è ïðîñâåòëåíèÿ
ðàñòâîðà è îõëàæäàþò äî êîìíàòíîé òåìïåðàòóðû (18-20 Ñ). Çàòåì
äîâîäÿò pH äî 6,0+0,2 C ïîìîùüþ 1%-íîãî ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè
íàòðèÿ è â ñîäåðæèìîå êîëáû äîáàâëÿþò 0,1 ñì3 ðàñòâîðà N5
(ãèäðîïåðèò). Ãîòîâÿò íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì, íå
õðàíÿò.
4. ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÈÌÌÍÓÍÎÔÅÐÌÅÍÒÍÎÃÎ ÀÍÀËÈÇÀ
4.1. Èç êîìïëåêòà íàáîðà áåðóò ïëàíøåò (êîìïîíåíò 3), â
ëóíêàõ êîòîðîãî àäñîðáèðîâàí î÷èùåííûé àíòèãåí âèðóñà èíôåêöèîí-
íîãî áðîíõèòà êóð è èñïîëüçóþò äëÿ ïîñòàíîâêè èììóíîôåðìåíòíîãî
àíàëèçà.
4.2. Ðàçâåäåíèå èñïûòóåìûõ ñûâîðîòîê.
Îáðàçöû èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè ðàçâîäÿò ðàñòâîðîì
N1. Ñ ýòîé öåëüþ ê 2,0 ñì3 óêàçàííîãî ðàñòâîðà äîáàâëÿþò 0,01
ñì3 ñûâîðîòêè êðîâè êóð, ïåðåìåøèâàþò è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå
1:200.
4.3. Â òðè ëóíêè ïëàíøåòà âåðòèêàëüíîãî ðÿäà À1, B1, C1
âíîñÿò ïî 0,1 ñì3 ïîëîæèòåëüíîé ñûâîðîòêè êðîâè (ïîëîæèòåëüíûé
êîíòðîëü), à â òðè ñëåäóþùèå ëóíêè D1, Å1, F1 âíîñÿò ïî 0,1 ñì3
îòðèöàòåëüíîé ñûâîðîòêè êðîâè (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü); ëóíêè
G1, H1 ñëóæàò äëÿ êîíòðîëÿ ðàñòâîðà êîíúþãàòà è
ñóáñòðàòíî-èíäèêàòîðíîé ñìåñè (ôîíîâûé êîíòðîëü), â êîòîðûå
âíîñÿò ïî 0,1 ñì3 ðàñòâîðà N 1.
4.4. Â îñòàëüíûå ëóíêè ïëàíøåòà ðÿäîâ Â2-Â12…Í2-H12
âíîñÿò ïî 0,1 ñì3 ðàñòâîðà N1, à â ëóíêè ãîðèçîíòàëüíîãî ðÿäà
À2-À12 — ïî 0,2 ñì3 èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòêè êðîâè,
ïîäãîòîâëåííûõ ïî ï.4.2. è ïðîâîäÿò ðàñòèòðîâêó ïî âåðòèêàëüíûì
ðÿäàì, íà÷èíàÿ îò ðàçâåäåíèÿ 1:200 äî 1:25600. Ñ ýòîé öåëüþ èç
ëóíîê À2-À12 îòáèðàþò ïî 0,1 ñìÇ ðàçâåäåííûõ èññëåäóåìûõ
ñûâîðîòîê êðîâè è ïåðåíîñÿò â ëóíêè Â2-Â12 ñîîòâåòñòâóþùåãî
ðÿäà, ïèïåòèðóþò è ïðîâîäÿò äâóêðàòíûå ïîñëåäîâàòåëüíûå
ðàçâåäåíèÿ ïåðåíîñîì ïî 0,1 ñì3 â î÷åðåäíóþ ëóíêó âåðòèêàëüíîãî
ðÿäà, óäàëÿÿ èç ïîñëåäíèõ ëóíîê Í2-Í12 ïî î, 1 ñì3.
4.5. Ïëàíøåò îñòîðîæíî âñòðÿõèâàþò äëÿ ïåðåìåøèâàíèÿ
ñîäåðæèìîãî, çàêðûâàþò êðûøêîé è ïåðåíîñÿò â òåðìîñòàò
(37,0+0,5Ñ) íà 30 ìèí. Çàòåì ëóíêè ïëàíøåòà îñâîáîæäàþò îò
ñîäåðæèìîãî ïóòåì âûòðÿõèâàíèÿ, òðåõêðàòíî ïðîìûâàþò (ïî 3 ìèí)
ðàñòâîðîì N1 è ïîäñóøèâàþò (ïóòåì ïîñòóêèâàíèÿ ïëàíøåòîì ïî
ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãå).
4.6. Ãîòîâÿò ðàñòâîð N4 ïî ï.3.6. è âíîñÿò âî âñå ëóíêè
ïëàíøåòà ïî 0,1 ñì3, çàòåì ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 30 ìèí.
Ïîñëå ýòîãî ñîäåðæèìîå óäàëÿþò, ëóíêè òðåõêðàòíî ïðîìûâàþò,
óäàëÿþò ñîäåðæèìîå è ïîäñóøèâàþò ïóòåì ïîñòóêèâàíèÿ ïåðåâåðíóòûì
ïëàíøåòîì ïî ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãå.
4.7. Ãîòîâÿò ðàñòâîð N6 ïî ï.3.6. âî âñå ëóíêè ïëàíøåòà
âíîñÿò ïî î,1 ñì3 ðàñòâîðà N6 — ñóáñòðàòíî-èíäèêàòîðíóþ ñìåñü
è îñòàâëÿþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òåìíîì ìåñòå íà 10-15 ìèí.
4.8. Âûÿâëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ìîæíî ïðîâîäèòü è áåç
ðàñòèòðîâêè èñïûòóåìûõ ñûâîðîòîê, â ýòîì ñëó÷àå âíà÷àëå ïðîâîäÿò
ðàñòèòðîâêó êîíòðîëüíûõ îáðàçöîâ ñûâîðîòîê: ïîëîæèòåëüíîé è
îòðèöàòåëüíîé.
Ïðåäâàðèòåëüíî â ëóíêè ïëàíøåòà îò Â11 è Â12 äî Í11 è Í12
âíîñÿò ïî 0,1 ñì3 ðàñòâîðà N1, à çàòåì â ëóíêè A11 è A12
âíîñÿò ïî 0,2 ñì3 ñîîòâåòñòâåííî ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé
ñûâîðîòîê â ðàçâåäåíèÿ 1:200 è ïðîâîäÿò äâóêðàòíóþ ðàñòèòðîâêó
êîíòðîëüíûõ ñûâîðîòîê èç íàáîðà ïî âåðòèêàëüíûì ðÿäàì îò 1:200
äî 1:25600, óäàëÿÿ èç ïîñëåäíèõ ëóíîê ïî 0,1 ñì3 ñîäåðæèìîãî.
Äëÿ âèçóàëüíîãî è ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêîãî ó÷åòà ðåçóëüòàòîâ
ðåàêöèè îáðàçöû èññëåäóåìûõ (èñïûòóåìûõ) ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè
áåðóò â ðàçâåäåíèè 1:200 è âíîñÿò ïî 0,1 ñì3 â ñâîáîäíûå ëóíêè
ïëàíøåòà, èñïîëüçóÿ ïî îäíîé ëóíêå íà êàæäóþ ïðîáó.
Îñòàëüíûå ýòàïû ïîñòàíîâêè àíàëèçà ïðîâîäÿò àíàëîãè÷íî
ï.ï.4.6., 4.7., 4.8.
4.9. Ïðè ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêîì ó÷åòå ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà
âî âñå ëóíêè ïëàíøåòà äëÿ îñòàíîâêè ðåàêöèè íåîáõîäèìî âíåñòè ïî
0,05 ñì3 «ñòîï-ðåàãåíòà», ïðåäñòàâëÿþùåãî ñîáîé 0,5 Ì ðàñòâîð
ñåðíîé êèñëîòû (2 ñì3 H2 SO4 + 18,0 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé
âîäû).
5. Ó×ÅÒ ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠÐÅÀÊÖÈÈ
5.1. Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà ïðîâîäÿò ÷åðåç 10-15 ìèí
îäíèì èç ñïîñîáîâ: âèçóàëüíî — ïî èíòåíñèâíîñòè îêðàøèâàíèÿ
ñîäåðæèìîãî ëóíîê ïëàíøåòà èëè èíñòðóìåíòàëüíî — ñ ïîìîùüþ
ñïåêòðîôîòîìåòðà ñ âåðòèêàëüíûì ëó÷îì ñâåòà ïóòåì èçìåðåíèÿ
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ïðè äëèíå âîëíû 450 íì.
5.2. Ïðè âèçóàëüíîé îöåíêå ðåçóëüòàòîâ ïåðâîíà÷àëüíî
ïðîâîäÿò ó÷åò ðåàêöèè ïî êîíòðîëüíûì ëóíêàì ïëàíøåòà: â ëóíêàõ ñ
ïîëîæèòåëüíîé ñûâîðîòêîé (ðÿä À11…Í11; ëóíêè À1, Â1, Ñ1)
îêðàøèâàíèå äîëæíî áûòü îò æåëòîâàòîãî äî òåìíî-êîðè÷íåâîãî
öâåòà. Ñ ðàçâåäåíèåì ïîëîæèòåëüíîé ñûâîðîòêè èíòåíñèâíîñòü
îêðàøèâàíèÿ óìåíüøàåòñÿ. Îêðàøèâàíèå ñîäåðæèìîãî ñ îòðèöàòåëüíîé
ñûâîðîòêîé è áåç ñûâîðîòêè (ôîíîâûé êîíòðîëü) äîëæíî
îòñóòñòâîâàòü èëè ñîäåðæèìîå ìîæåò èìåòü íåçíà÷èòåëüíóþ
æåëòîâàòóþ îêðàñêó (ðÿä À12…Í12; ëóíêè D1, Å1, F1, G1, H1).
Ðåàêöèÿ ó÷èòûâàåòñÿ ïðè ïðàâèëüíûõ ïîêàçàíèÿõ êîíòðîëåé. Ýòî
äàåò îñíîâàíèå ñ÷èòàòü, ÷òî êîìïîíåíòû íàáîðà ñîîòâåòñòâóþò
òðåáîâàíèÿì ÒÓ, è ìîæíî ïðèñòóïèòü ê ó÷åòó ðåàêöèè ñ ïðîáàìè
èñïûòóåìûõ ñûâîðîòîê.
5.3. Âèçóàëüíûé ó÷åò ðåçóëüòàòîâ îñíîâàí íà ñðàâíåíèè
èíòåíñèâíîñòè öâåòíîé îêðàñêè ñîäåðæèìîãî ëóíîê ïëàíøåòà
èñïûòóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè ñ îêðàñêîé ëóíîê êîíòðîëüíîãî
ïîëîæèòåëüíîãî îáðàçöà (âåðòèêàëüíûé ðÿä À11…H11).
Èíòåíñèâíîñòü öâåòíîé ðåàêöèè ïðÿìîïðîïîðöèîíàëüíà êîëè÷åñòâó
àíòèòåë â èññëåäóåìûõ ïðîáàõ ñûâîðîòêè êðîâè. ×åì âûøå
èíòåíñèâíîñòü îêðàñêè ñîäåðæèìîãî ëóíîê (îò æåëòîâàòîãî äî
òåìíî-êîðè÷íåâîãî), òåì âûøå òèòð àíòèòåë â èññëåäóåìûõ ïðîáàõ.
5.4. Ïðè ïîñòàíîâêå ðåàêöèè áåç ðàñòèòðîâêè èñïûòóåìûõ ïðîá
òèòð ñûâîðîòêè îïðåäåëÿþò ïî èíòåíñèâíîñòè îêðàøèâàíèÿ
èñïûòóåìûõ ñûâîðîòîê â ñðàâíåíèè ñ èíòåíñèâíîñòüþ îêðàøèâàíèÿ
ðàçëè÷íûõ ðàçâåäåíèé ïîëîæèòåëüíîé êîíòðîëüíîé ñûâîðîòêè (ðÿä
À11…Í11), êîòîðàÿ ÿâëÿåòñÿ êàê áû ýòàëîííîé øêàëîé äëÿ îöåíêè
ðåçóëüòàòîâ.
 ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè òî÷íîãî îïðåäåëåíèÿ òèòðà ñûâîðîòêè
åå ðàñòèòðîâûâàþò êàê óêàçàíî â ï.4.4.
5.5. Ðàñòèòðîâêà ïðîá èñïûòóåìûõ ñûâîðîòîê êðîâè äàåò
âîçìîæíîñòü êîëè÷åñòâåííî îöåíèâàòü òèòð ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë.
Çà òèòð èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè êðîâè ïðèíèìàþò åå ïîñëåäíåå
ðàçâåäåíèå, ïðè êîòîðîì íàáëþäàþò âèäèìîå ãëàçîì öâåòíîå
îêðàøèâàíèå ñîäåðæèìîãî ëóíîê, áîëåå èíòåíñèâíîå ïî ñðàâíåíèþ ñ
îêðàøèâàíèåì ñûâîðîòîê îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ. Ïîëîæèòåëüíûìè
ñ÷èòàþòñÿ ïðîáû ñûâîðîòîê, èìåþùèå îêðàñêó ðàçíîé ñòåïåíè
èíòåíñèâíîñòè, ñîäåðæèìîå ëóíîê êîòîðûõ ñðàâíèìî ñ îêðàñêîé
ïîëîæèòåëüíîé êîíòðîëüíîé ñûâîðîòêè (ëóíêè ïëàíøåòà À11…Í11).
Îòðèöàòåëüíûìè ñ÷èòàþòñÿ ïðîáû ñûâîðîòîê, íå èçìåíèâøèõ
îêðàñêó èëè èìåþùèõ íåçíà÷èòåëüíîå æåëòîâàòîå îêðàøèâàíèå
ñîäåðæèìîãî ëóíîê, ñðàâíèìîå ñ îêðàøèâàíèåì îòðèöàòåëüíîé
êîíòðîëüíîé ñûâîðîòêè (ëóíêè ïëàíøåòà À12…Í12).
5.6. Èíñòðóìåíòàëüíûé — ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêèé ó÷åò
ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà ïîçâîëÿåò êîëè÷åñòâåííî îöåíèòü òèòðû
ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë â èññëåäóåìûõ ïðîáàõ ïóòåì èçìåðåíèé
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè (ÎÏ) ïðè äëèíå âîëíû 450 íì ñ îäíîâðåìåííîé
çàïèñüþ ðåçóëüòàòîâ ñ êàæäîé ëóíêè ïëàíøåòà íà ëèñòå áóìàãè èëè
ñïåöèàëüíîé áóìàæíîé ëåíòå.
5.7. Ïðè ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêîì ó÷åòå ðåçóëüòàòû îïòè÷åñêîé
ïëîòíîñòè âûðàæàþò â îïòè÷åñêèõ åäèíèöàõ.
Î ðåçóëüòàòàõ ðåàêöèè ñóäÿò ïî êîýôôèöèåíòó ñîîòíîøåíèé
ìåæäó ïîêàçàíèÿìè îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé èññëåäóåìûõ ïðîá
ñûâîðîòîê è òàêîâûì êîíòðîëüíîãî îáðàçöà.
Äëÿ ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè êîýôôèöèåíò ñîîòíîøåíèé äîëæåí
ïðåâûøàòü áîëåå ÷åì â 2,1 ðàçà îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü
îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î âûÿâëåíèè
ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âèðóñó ÈÁÊ â èññëåäóåìîé ïðîáå.
Äëÿ îòðèöàòåëüíîé ðåàêöèè êîýôôèöèåíò ñîîòíîøåíèé ìåæäó
ïîêàçàíèÿìè îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé äîëæåí áûòü ìåíüøå 2,0, ÷òî
ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòñóòñòâèè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë â
èññëåäóåìîé ïðîáå ñûâîðîòêè.
Åñëè êîýôôèöèåíò ñîîòíîøåíèé îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé ðàâåí
2,0, òî ðåàêöèÿ îöåíèâàåòñÿ êàê ñîìíèòåëüíàÿ, à èñïûòóåìàÿ ïðîáà
ñûâîðîòêè êðîâè ïîäëåæèò ïîâòîðíîìó èññëåäîâàíèþ è ïðè
ïîäòâåðæäåíèè ïåðâîíà÷àëüíîãî ðåçóëüòàòà ñ÷èòàåòñÿ ïîëîæèòåëüíîé.
6. ÎÖÅÍÊÀ ÐÅÇÓËÜÒÀÒÎÂ ÐÅÀÊÖÈÈ
6.1. Îáíàðóæåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë â èññëåäóåìûõ ïðîáàõ
ñûâîðîòîê â òèòðå îò 1:200 è âûøå ó 50 è áîëåå ïðîöåíòîâ
ïòèöåïîãîëîâüÿ, ãäå íå ïðîâîäèòñÿ ñïåöèôè÷åñêàÿ ïðîôèëàêòèêà
ïðîòèâ ÈÁÊ, ÿâëÿåòñÿ äèàãíîñòè÷åñêè ïîëîæèòåëüíûì òèòðîì è
ñâèäåòåëüñòâóåò î íåáëàãîïîëó÷èè è ïåðñèñòåíöèè ïîëåâîãî âèðóñà
ÈÁÊ â ïòèöåõîçÿéñòâå.  ýòîì ñëó÷àå ïîëîæèòåëüíûå ñûâîðîòêè
ðàñòèòðîâûâàþò è ïðè âûÿâëåíèè òèòðîâ àíòèòåë 1:800 è âûøå
ïðîâîäÿò âûäåëåíèå âèðóñà ÈÁÊ è ïîñòàíîâêó áèîïðîáû.
6.2. Ïðè èññëåäîâàíèè «ïàðíûõ» ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè è
îáíàðóæåíèè íàðàñòàíèÿ òèòðà ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë â ÷åòûðå è
áîëåå ðàç íå ìåíåå, ÷åì ó 50% èññëåäóåìûõ ïðîá äàåò îñíîâàíèå
äëÿ ïîñòàíîêè äèàãíîçà íà èíôåêöèîííûé áðîíõèò êóð.
Îáíàðóæåíèå íàðàñòàíèÿ òèòðà àíòèòåë â èññëåäóåìûõ ïðîáàõ,
íå äîñòèãàþùåãî ÷åòûðåõêðàòíîãî óâåëè÷åíèÿ, èëè âûÿâëåíèå
íàðàñòàíèÿ òèòðà ìåíåå, ÷åì â 50% èñïûòóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê
êðîâè, ñëóæàò îñíîâàíèåì äëÿ ïðîâåäåíèÿ äîïîëíèòåëüíûõ
âèðóñîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé.
6.3. Ïðè èñïîëüçîâàíèè íàáîðà äëÿ êîíòðîëÿ íàïðÿæåííîñòè
ïîñòâàêöèíàëüíîãî èììóíèòåòà èññëåäóþò ñûâîðîòêè êðîâè ÷åðåç ç-4
íåäåëè ïîñëå ïðèìåíåíèÿ âàêöèíû. Ïðè ýòîì óðîâåíü
ïîñòâàêöèíàëüíûõ àíòèòåë äîëæåí áûòü íå íèæå 1:400 áîëåå ÷åì â
80% èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê.
Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ðàçðàáîòàíû âåäóùèì íàó÷íûì ñîòðóäíè-
êîì îòäåëà âèðóñîëîãèè ÂÍÈÂÈÏ, êàíäèäàòîì âåòåðèíàðíûõ íàóê, îò-
âåòñòâåííûì ðàçðàáîò÷èêîì Ñåðãååâûì Â.Ä.
Âíèìàíèå! Ýòîò ñïðàâî÷íèê äîñòóïåí íà CD. Ïîäðîáíàÿ èíôîðìàöèÿ îáî âñåõ ïðåïàðàòàõ, óäîáíûé ïîèñê, àâòîìàòè÷åñêîå îáíîâëåíèå êàòàëîãà. Ïîäðîáíåå »»
Àëôàâèòíûé óêàçàòåëü
| Ïðåïàðàòû ïî ïðîèçâîäèòåëÿì
| Ïðåïàðàòû ïî çàáîëåâàíèÿì
| Ïîèñê
- Êóïèòü ÍÀÁÎÐ ÄËß ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÀÍÒÈÒÅË Ê ÂÈÐÓÑÓ ÈÍÔÅÊÖÈÎÍÍÎÃÎ ÁÐÎÍÕÈÒÀ ÊÓÐ (ÈÁÊ) ÈÌÌÓÍÎÔÅÐÌÅÍÒÍÛÌ ÌÅÒÎÄÎÌ îïòîì.
ÍÀÁÎÐ ÄËß ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÀÍÒÈÒÅË Ê ÂÈÐÓÑÓ ÈÍÔÅÊÖÈÎÍÍÎÃÎ ÁÐÎÍÕÈÒÀ ÊÓÐ (ÈÁÊ) ÈÌÌÓÍÎÔÅÐÌÅÍÒÍÛÌ ÌÅÒÎÄÎÌ
Ñîñòàâ è ôîðìà âûïóñêà
 ñîñòàâ íàáîðà âõîäÿò 9 êîìïîíåíòîâ (Ê1 — Ê9). Èììóíîñïåöèôè÷åñêèå êîìïîíåíòû: Ê1 — ïîëîæèòåëüíàÿ ê âèðóñó ÈÁÊ ñûâîðîòêà êðîâè êóð (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü) öåëüíàÿ ëèîôèëèçèðîâàííàÿ, 1 ìë èëè â íàòèâíîì âèäå — 0,2 ìë — 1 àìïóëà (ôëàêîí); Ê2 — îòðèöàòåëüíàÿ ñûâîðîòêà êðîâè êóð (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü), íå ñîäåðæàùàÿ àíòèòåë ê âèðóñó ÈÁÊ, öåëüíàÿ, ëèîôèëèçèðîâàííàÿ, 1,0 ìë èëè â íàòèâíîì âèäå — 0,2 ìë — 1 àìïóëà (ôëàêîí); Ê3 — î÷èùåííûé àíòèãåí âèðóñà ÈÁÊ, àäñîðáèðîâàííûé â ëóíêàõ ïëàíøåòà äëÿ ÈÔÀ — 2 ïëàíøåòà; Ê4 — àíòèâèäîâîé èììóíîïåðîêñèäàçíûé êîíúþãàò ïðîòèâ lgG êóð, ñóõîé â îáúåìå 0,5 ìë èëè â íàòèâíîì âèäå — 0,2 ìë — 1 àìïóëà, ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå 1: (óêàçûâàåòñÿ äëÿ êàæäîé ñåðèè). Íåñïåöèôè÷åñêèå êîìïîíåíòû: Ê5 — íàáîð ñîëåé äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ áóôåðíîãî ðàñòâîðà äëÿ èñïûòóåìûõ è êîíòðîëüíûõ ïðîá, àíòèâèäîâîãî êîíúþãàòà è ìåæýòàïíîé ïðîìûâêè: òðèñ (îêñèìåòèë) àìèíîìåòàí — 0,97 ã (Ê5.1), òðèñ (îêñèìåòèë) àìèíîìåòàí ãèäðîõëîðèä — 6,61 ã (Ê5.2), íàòðèé õëîðèñòûé’ — 11,7 ã (Ê5.3); Ê6 — íàáîð ñîëåé äëÿ ïðèãîòîâëåíèé ñóáñòðàòíîãî áóôåðà: íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé — 5,37 ã — 1 ôëàêîí (Ê6.1), ëèìîííàÿ êèñëîòà — 1,57 ã — 1 ôëàêîí (Ê6.2); Ê7 — äåòåðãåíò òâèí 20, æèäêèé — 1 ìë — 1 ôëàêîí; Ê8 — ñóáñòðàò — îðòîôåíèëåíäèàìèí, 1 òàáëåòêà âî ôëàêîíå; Ê9 — ïåðåêèñü âîäîðîäà, ãèäðîïåðèò, òàáëåòêà 1 ã — 1 øò. â óïàêîâêå.
Ôàðìàêîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà
Ñóùíîñòü ìåòîäà çàêëþ÷àåòñÿ â âûÿâëåíèè îáðàçîâàâøåãîñÿ íà ïîâåðõíîñòè ëóíîê ïîëèñòèðîëîâîãî ïëàíøåòà êîìïëåêñà àíòèãåí-àíòèòåëî. Ñïåöèôè÷åñêèé êîìïëåêñ âçàèìîäåéñòâóåò ñ àíòèâèäîâûì èììóíîïåðîêñèäàçíûì êîíúþãàòîì ïðîòèâ lgG êóð è âûçûâàåò ðàçëîæåíèå ñóáñòðàòà, îêðàøèâàÿ ñîäåðæèìîå ëóíîê ïëàíøåòà. Íàáîð ðàññ÷èòàí íà ïðîâåäåíèå 176 àíàëèçîâ ñûâîðîòîê êðîâè êóð ïðè èññëåäîâàíèè â îäíîì ðàçâåäåíèè 1 : 400, ïðè ðàñòèòðîâêå ñûâîðîòîê îò 1 : 100 äî 1 : 12800 — íà 20 àíàëèçîâ.
Ïîêàçàíèÿ
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ïðîòèâ âèðóñà èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà êóð (ÈÁÊ) â ñûâîðîòêàõ êðîâè êóð èììóíîôåðìåíòíûì ìåòîäîì (ÈÔÌ).
Äîçû è ñïîñîá ïðèìåíåíèÿ
Äëÿ èññëåäîâàíèÿ â ëàáîðàòîðèþ äîñòàâëÿþò èç ïòèöåõîçÿéñòâ ñûâîðîòêè êðîâè êóð îò 25 ãîëîâ (ïî 0,2 — 0,3 ìë). Ïðîáû ñûâîðîòîê õðàíÿò â ìîðîçèëüíîé êàìåðå áûòîâîãî õîëîäèëüíèêà. Äëÿ ïîñòàíîâêè ìåòîäà ÈÔÀ èñïîëüçóþò: îäíî- è âîñüìèêàíàëüíûå àâòîìàòè÷åñêèå ïèïåòêè ïîñòîÿííîãî è ïåðåìåííîãî îáúåìà äî 0,02 ìë è äî 0,2 ìë ñî ñìåííûìè íàêîíå÷íèêàìè, òåðìîñòàò ñ òåìïåðàòóðîé íàãðåâà (37 + 0,5 °Ñ), áûòîâîé õîëîäèëüíèê, ðÍ ìåòð, ðèäåð ëþáîé ìîäåëè äëÿ ó÷åòîâ ðåçóëüòàòîâ ÈÔÀ. Ïåðåä ïðèãîòîâëåíèåì ðàáî÷èõ ðàñòâîðîâ íàáîð ñ êîìïîíåíòàìè âûäåðæèâàþò 30 ìèíóò, ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå (20 — 22 °Ñ). Ðàñòâîð ¹ 1. Ñîäåðæèìîå ôëàêîíîâ Ê5.1, Ê5.2 è Ê5.3 ðàñòâîðÿþò â 1000 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû è èçìåðÿþò ïîêàçàíèå ðÍ, êîòîðîå äîëæíî áûòü â ïðåäåëàõ 7,4 — 7,6. Çàòåì â ýòîò ðàñòâîð âíîñÿò ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê7, ïîëó÷àÿ êîíå÷íóþ êîíöåíòðàöèþ äåòåðãåíòà 0,01 %. Äàííûé ðàñòâîð èñïîëüçóþò äëÿ ðàçâåäåíèÿ êîíòðîëüíûõ ñûâîðîòîê, èñïûòóåìûõ ïðîá, àíòèâèäîâîãî êîíúþãàòà è ìåæýòàïíîé ïðîìûâêè. Ðàñòâîð ¹ 2. Ôîñôàòíî-öèòðàòíûé áóôåð ðÍ 4,9 — 5,0. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ áóôåðà ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê6.1 ðàñòâîðÿþò â 50 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû, ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê6.2 òàêæå â 50 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Çàòåì ñìåøèâàþò 24,3 ìë ðàñòâîðà Ê6.1 ñ 25,7 ìë ðàñòâîðà Ê6.2, äîáàâëÿþò 50 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ïîëó÷åííûé ðàñòâîð äîëæåí èìåòü ðÍ 4,9 — 5,0 ïðè íåîáõîäèìîñòè äîáàâëÿþò êèñëûé (Ê6.2) èëè ùåëî÷íîé (Ê6.1) êîìïîíåíòû. Ðàñòâîð ¹ 3. Ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê1 ðàñòâîðÿþò â 1,0 ìë ðàñòâîðà ¹ 1. Ãîòîâÿò ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì. Ñûâîðîòêà Ê1 â íàòèâíîì âèäå ãîòîâà äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ ïî âûøåîïèñàííîìó ñïîñîáó. Ðàñòâîð ¹ 4. Ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê2 ñ îòðèöàòåëüíîé ñûâîðîòêîé êðîâè êóð ðàñòâîðÿþò â 1 ìë ðàñòâîðà ¹ 1. Ðàñòâîð ¹ 4 ãîòîâÿò ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì. Ñûâîðîòêà Ê2 â íàòèâíîì âèäå ãîòîâà äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ ïî âûøåîïèñàííîìó ìåòîäó. Ðàñòâîð ¹ 5. Ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê4 ñ àíòèâèäîâûì êîíúþãàòîì ðàñòâîðÿþò â 0,5 ìë ðàñòâîðà ¹ 1. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðàáî÷åãî ðàçâåäåíèÿ 1: èç ýòîãî ôëàêîíà èëè èç íàòèâíîãî ïðåïàðàòà êîíúþãàòà îòáèðàþò ìë íà 10 ìë ðàñòâîðà ¹1 (íà 1 ïëàíøåò), ãîòîâÿò ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì. Ðàñòâîð ¹ 6. 1 òàáëåòêó ãèäðîïåðèòà ðàñòâîðÿþò â 20 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ðàñòâîð ¹ 7. Ñóáñòðàòíî-èíäèêàòîðíàÿ ñìåñü. Ñîäåðæèìîå ôëàêîíà Ê8 (òàáëåòêó) ðàñòâîðÿþò â 20 ìë ðàñòâîðà ¹ 2, âñòðÿõèâàþò äî ïîëíîãî ðàñòâîðåíèÿ è äîáàâëÿþò íà êàæäûå 10 ìë ýòîãî ðàñòâîðà ïî 0,4 ìë ðàñòâîðà ¹ 6. Ãîòîâÿò ðàñòâîð ¹ 7 íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì.  ñâÿçè ñ âûñîêîé òîêñè÷íîñòüþ ÎÔÄ ïðèãîòîâëåíèå ñóáñòðàòíî-èíäèêàòîðíîé ñìåñè ïðîâîäèòü â ðåçèíîâûõ ïåð÷àòêàõ, èçáåãàÿ ïîïàäàíèÿ íà êîæó è ñëèçèñòûå îáîëî÷êè. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè — èç êîìïëåêòà íàáîðà áåðóò ïëàíøåò (Ê3), â ëóíêàõ êîòîðîãî àäñîðáèðîâàí î÷èùåííûé àíòèãåí âèðóñà ÈÁÊ, è èñïîëüçóþò äëÿ ïîñòàíîâêè èììóíîôåðìåíòíîãî ìåòîäà. Ðàçâåäåíèå ñûâîðîòîê — îáðàçöû èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè ðàçâîäÿò 1 : 100 ðàñòâîðîì ¹ 1. Ñ ýòîé öåëüþ ê 0,01 ìë ñûâîðîòêè êðîâè êóð äîáàâëÿþò 1 ìë ðàñòâîðà ¹ 1 è ïåðåìåøèâàþò.  ëóíêè ðÿäîâ ïëàíøåòà Â1 — 12… Í1 — 12 âíîñÿò ïî 0,1 ìë ðàñòâîðà ¹ 1, à â ëóíêè À2 — 11 âíîñÿò ïî 0,2 ìë èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè, è ïðîâîäÿò ðàñòèòðîâêó ïî âåðòèêàëüíûì ðÿäàì, íà÷èíàÿ ñ 1 : 100 äî 1 : 12800.  ëóíêè À1 è À12 âíîñÿò ðàçâåäåíèÿ 1 : 100 êîíòðîëüíûõ (îòðèöàòåëüíîé è ïîëîæèòåëüíîé) ñûâîðîòîê è òàêæå ïðîâîäÿò ðàñòèòðîâêó ïî âåðòèêàëüíûì ðÿäàì. Èç ïîñëåäíèõ ëóíîê Í1 — Í12 óäàëÿþò ïî 0,1 ìë. Ïðè îáíàðóæåíèè âûñîêèõ òèòðîâ àíòèòåë â èñïûòóåìûõ ïðîáàõ ïðîâîäÿò ðàñòèòðîâêó ïî ãîðèçîíòàëüíûì ðÿäàì ïëàíøåòà. Ïëàíøåò îñòîðîæíî âñòðÿõèâàþò, çàêðûâàþò êðûøêîé è ïåðåíîñÿò â òåðìîñòàò íà 37 °Ñ íà 2 ÷àñà. Çàòåì ëóíêè ïëàíøåòà îñâîáîæäàþò îò ñîäåðæèìîãî ïóòåì âûòðÿõèâàíèÿ è òðåõêðàòíî ïðîìûâàþò ðàñòâîðîì ¹ 1. Ãîòîâÿò ðàñòâîð ¹ 5 ïî âûøåîïèñàííîìó ñïîñîáó è âíîñÿò âî âñå ëóíêè ïëàíøåòà ïî 0,1 ìë, çàòåì îïÿòü ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 1 ÷àñ è ïðîìûâàþò. Ãîòîâÿò ðàñòâîð ¹ 7 è âíîñÿò âî âñå ëóíêè ïî 0,1 ìë. Îñòàâëÿþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òåìíîì ìåñòå 5 — 10 ìèíóò. Îñòàíàâëèâàþò ðåàêöèþ äîáàâëåíèåì â êàæäóþ ëóíêó 0,05 ìë ñåðíîé êèñëîòû, ïðèãîòîâëåííîé ïóòåì ðàñòâîðåíèÿ 2 ìë êîíöåíòðèðîâàííîé ñåðíîé êèñëîòû â 10 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû (â íàáîðå îòñóòñòâóåò). Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà ïðîâîäÿò ïîñëå îñòàíîâêè ðåàêöèè îäíèì èç ñïîñîáîâ: âèçóàëüíî — ïî èíòåíñèâíîñòè îêðàøèâàíèÿ ñîäåðæèìîãî ëóíîê ïëàíøåòà èëè èíñòðóìåíòàëüíî — ñ ïîìîùüþ ñïåêòðîôîòîìåòðà ñ âåðòèêàëüíûì ëó÷îì ïðè äëèíå âîëíû 492 íì. Ïðè âèçóàëüíîì ñïîñîáå ó÷åòà ïåðâîíà÷àëüíî ïðîâîäÿò îöåíêó ðåçóëüòàòîâ ïî êîíòðîëüíûì ëóíêàì ïëàíøåòà: ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü ïðè ðàñòèòðîâêå îêðàøèâàåòñÿ â æåëòûé öâåò ðàçëè÷íîé èíòåíñèâíîñòè.  ëóíêàõ ñ îòðèöàòåëüíûì êîíòðîëåì ðàñòâîð îñòàåòñÿ íåîêðàøåííûì èëè íåçíà÷èòåëüíî æåëòååò. Ïðè âèçóàëüíîì ó÷åòå ñðàâíèâàþò îêðàñêó ñîäåðæèìîãî ëóíîê ïëàíøåòà èñïûòóåìûõ ïðîá ñ îêðàñêîé ëóíîê êîíòðîëüíûõ îáðàçöîâ. Çà òèòð èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè ïðèíèìàþò ïîñëåäíåå ðàçâåäåíèå åå, ïðè êîòîðîì íàáëþäàþò âèäèìîå ãëàçîì öâåòîâîå îêðàøèâàíèå, áîëåå èíòåíñèâíîå ïî ñðàâíåíèþ ñ îòðèöàòåëüíûì êîíòðîëåì. Èíñòðóìåíòàëüíûé ôîòîìåòðè÷åñêèé ó÷åò ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà ïîçâîëÿåò êîëè÷åñòâåííî îöåíèòü òèòðû ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë â èññëåäóåìûõ ïðîáàõ ïóòåì èçìåðåíèÿ çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè (ÎÏ 492 íì). Êîíå÷íûì ðàçâåäåíèåì èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè ñ÷èòàåòñÿ ïîñëåäíåå åå ðàçâåäåíèå, â êîòîðîì îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü ïðåâûøàåò òàêîâóþ îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ â 2 — 2,1 ðàçà. Ðàñ÷åò òèòðà ñûâîðîòîê ïðè ïîñòàíîâêå ðåàêöèè â îäíîì ðàçâåäåíèè 1 : 400. Âûÿâëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë â ñûâîðîòêàõ êðîâè ìîæíî ïðîâîäèòü è áåç ðàñòèòðîâêè èñïûòóåìûõ ñûâîðîòîê.  ýòîì ñëó÷àå âî âñå ëóíêè ïëàíøåòà À2 — 12 …Í2 — 12 âíîñÿò ïî 0,1 ìë èññëåäóåìûõ ïðîá ñûâîðîòîê â ðàçâåäåíèè 1:400 â îäíîé èëè äâóõ ïîâòîðíîñòÿõ, èñïîëüçóÿ ïî 1(2) ëóíêè íà êàæäóþ ïðîáó.  äâå ëóíêè Â1, Ñ1 âíîñÿò ïîëîæèòåëüíûå, à â äâå ïîñëåäóþùèå Ä1, Å1 — îòðèöàòåëüíûå êîíòðîëüíûå ñûâîðîòêè â ðàçâåäåíèè 1 : 400. Ëóíêè F1, G1, H1 ñëóæàò êîíòðîëåì êîíúþãàòà è çàïîëíÿþòñÿ ïî 0,1 ìë ðàñòâîðîì ¹ 1. Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè ïðîâîäèòñÿ ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè ïðè äëèíå âîëíû 492 íì. Äëÿ ïðåäïîëàãàåìîãî âàðèàíòà ó÷åòà ðàçëè÷èÿ ìåæäó ñðåäíèìè çíà÷åíèÿìè ïîëîæèòåëüíîé
è îòðèöàòåëüíîé êîíòðîëüíûõ ñûâîðîòîê (PCx — NCx) äîëæíî áûòü áîëåå 0,5. Çíà÷åíèÿ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè äëÿ îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ äîëæíû áûòü ìåíåå èëè ðàâíû 0,150. Íàëè÷èå èëè îòñóòñòâèå àíòèòåë ê âèðóñó ÈÁÊ îïðåäåëÿþò ïóòåì âû÷èñëåíèÿ îòíîøåíèÿ ñðåäíåé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè ïðè äëèíå âîëíû 492 íì ê ñðåäíåìó çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè (ÎÏ) ïîëîæèòåëüíîãî êîíòðîëÿ (S/Ð). Ïîëîæèòåëüíàÿ êîíòðîëüíàÿ ñûâîðîòêà ñòàíäàðòèçîâàíà è èìååò îïðåäåëåííûé òèòð àíòèòåë ê âèðóñó ÈÁÊ. Åñëè S/Ð îòíîøåíèå ìåíüøå èëè ðàâíî 0,15, ñûâîðîòêà áóäåò ñ÷èòàòüñÿ îòðèöàòåëüíîé. Åñëè S/Ð îòíîøåíèå áîëüøå ÷åì 0,15, ñûâîðîòêà ñîäåðæèò àíòèòåëà ê âèðóñó ÈÁÊ. Êîíå÷íîå çíà÷åíèå òèòðà ìîæåò áûòü ïîäñ÷èòàíî ïî S/Ð-îòíîøåíèþ ïðè ðàçâåäåíèè 1 : 400. Ðàñ÷åò òèòðà.
Ðàñ÷åò ñðåäíåãî çíà÷åíèÿ ÎÏ îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëÿ (NCx):
(Çíà÷åíèå Â1 ÎÏ(492) + Çíà÷åíèå Ñ1 ÎÏ(492))/2 = NCx
Ïðèìåð: (0,100 + 0,120)/2 = 0,110 (NCx = 0,110).
Ðàñ÷åò ñðåäíåãî çíà÷åíèÿ ÎÏ ïîëîæèòåëüíîãî êîíòðîëÿ (PCx):
(Çíà÷åíèå D1 ÎÏ(492) + Çíà÷åíèå E1 ÎÏ(492))/2 = PCx
Ïðèìåð: (0,720 + 0,690)/2 = 0,755 (PCx = 0,755).
Ðàñ÷åò S/Ð îòíîøåíèÿ:
(ÎÏ(492) èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè — NCx)/(PCx — NCx) = S/P
Ïðèìåð: Çíà÷åíèå îáðàçöà = 0,480
(0,480 — 0,110)/(0,755 — 0,110) = 0,370/0,645 = 0,574 (Çíà÷åíèå S/Ð=0,574).
Ðàñ÷åò òèòðà. log10Òèòð = 1,08(log10S/Ð) + 3,92. Ïðèìåð: S/Ð îòíîøåíèå ðàâíî 0,574. log10Òèòð = 1,08(log100,574) + 3,92. log10Òèòð = 1,08(-0,241)+3,92. log10Òèòð = 3,660. Òèòð = 103,660 = 4571. Èíòåðïðåòàöèÿ ðåçóëüòàòîâ. Ïî ðåçóëüòàòàì ÈÔÀ îïðåäåëÿþò íàïðÿæåííîñòü èììóíèòåòà â ïàðòèè ïðèâèòûõ öûïëÿò ïóòåì äåëåíèÿ êîëè÷åñòâà ïðîá ñ òèòðîì àíòèòåë 1 : 800 è âûøå ê îáùåìó êîëè÷åñòâó èññëåäîâàííûõ ñûâîðîòîê è âûðàæàþò â ïðîöåíòàõ. Ïòèöó ñ÷èòàþò èììóííîé ê âèðóñó èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà ïðè íàïðÿæåííîñòè èììóíèòåòà 80 è áîëåå ïðîöåíòîâ (ò. å., åñëè â 80 è áîëåå ïðîöåíòàõ ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè òèòð àíòèòåë äîñòèãàåò çíà÷åíèÿ 1 : 800 è âûøå). Ïòèöó âàêöèíèðóþò (ðåâàêöèíèðóþò) ïðè íàïðÿæåííîñòè èììóíèòåòà ìåíåå 80 %. Îáíàðóæåíèå âûñîêîãî óðîâíÿ àíòèòåë (áîëåå 1 : 800) ñâèäåòåëüñòâóåò î âîçìîæíîé öèðêóëÿöèè â ñòàäå ïîëåâîãî âèðóñà èíôåêöèîííîãî áðîíõèòà.  òàêèõ ñëó÷àÿõ ÷åðåç 21 — 30 äíåé ïðîâîäÿò ïîâòîðíîå èññëåäîâàíèå ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè, ïîëó÷åííûõ îò ýòèõ æå ïòèö. Íàðàñòàíèå òèòðîâ è (èëè) óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ïòèö ñ âûñîêèì óðîâíåì àíòèòåë ïðè íàëè÷èè êëèíè÷åñêèõ è ïàòîëîãîàíàòîìè÷åñêèõ ïðèçíàêîâ ÈÁÊ ÿâëÿåòñÿ îñíîâàíèåì äëÿ îáúÿâëåíèÿ â õîçÿéñòâå íåáëàãîïîëó÷èÿ ïî äàííîìó çàáîëåâàíèþ.
Îñîáûå óêàçàíèÿ
Àìïóëû, ôëàêîíû áåç ýòèêåòîê, ñ òðåùèíàìè, ñ èçìåíåííîé êîíñèñòåíöèåé ïîäëåæàò âûáðàêîâêå è îáåççàðàæèâàíèþ è óòèëèçàöèè.
Óñëîâèÿ õðàíåíèÿ
 çàùèùåííîì îò ñâåòà ìåñòå è òåìïåðàòóðå îò 2 äî 8 °Ñ. Ñðîê ãîäíîñòè íàáîðà — 12 ìåñÿöåâ.
ÏðîèçâîäèòåëüÔåäåðàëüíûé öåíòð îõðàíû çäîðîâüÿ æèâîòíûõ ÔÃÓ (ÂÍÈÈÇÆ ÔÃÓ), Ðîññèÿ
Àäðåñ: 600901, ã. Âëàäèìèð, ìêð. Þðüåâåö.
Òåë.: (4922) 26-06-14
Òåë./ôàêñ: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ruÏîäðîáíåå î ïðîèçâîäèòåëå
Âñå ïðåïàðàòû ïðîèçâîäñòâà Ôåäåðàëüíûé öåíòð îõðàíû çäîðîâüÿ æèâîòíûõ ÔÃÓ (ÂÍÈÈÇÆ ÔÃÓ), Ðîññèÿ
ÏðîäàâåöÌåñòî Âàøåé ðåêëàìû
Ïî âîïðîñàì ðàçìåùåíèÿ èíôîðìàöèè
î âåòåðèíàðíûõ ïðåïàðàòàõ è êîðìîâûõ äîáàâêàõ
â Ýëåêòðîííîì ñïðàâî÷íèêå «Âåòåðèíàðíûå ïðåïàðàòû â Ðîññèè»
è çàêëþ÷åíèÿ äîãîâîðîâ íà ïóáëèêàöèþ
îáðàùàéòåñü â ÎÎÎ «Âåòòîðã» ïî ýëåêòðîííîé ïî÷òå: vettorg@mail.ru
