Набор для диагностики инфекционной анемии лошадей
КРС и МРС
Вакцина ящурная культуральная моно- и поливалентная эмульгированная инактивированная
Вакцина антирабическая из штамма «Щелково-51» инактивированная жидкая культуральная (Рабиков)
Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма Brucella abortus 75/79-АВ живая сухая
Вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма бруцелла абортус № 82 живая сухая
Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма Brucella abortus 19 живая сухая
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вакцина против некробактериоза животных эмульгированная инактивированная
Вакцина ящурная культуральная моно- и поливалентная сорбированная инактивированная
Свиньи
Вакцина Циркостоп против цирковирусной инфекции свиней инактивированная
Вакцина ящурная культуральная моно- и поливалентная эмульгированная инактивированная
Вакцина против болезни Ауески инактивированная эмульгированная маркированная
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вакцина против рожи свиней из штамма ВР-2 живая сухая
Вакцина живая сухая против сальмонеллеза (паратифа) свиней из штамма ТС-177
Птица
Вакцина ИБК-ЩБК против инфекционного бронхита кур живая сухая
Вирусвакцина против ньюкаслской болезни из штамма «БОР-74 ВГНКИ» сухая
Вирусвакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота» сухая
Домашние животные
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51» для собак и кошек (Рабикан)
Лошади
Вакцина антирабическая из штамма «Щелково-51» инактивированная жидкая культуральная (Рабиков)
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вирусвакцина против ринопневмонии лошадей и сухая из штамма СВ/69
Диагностические препараты
Бруцеллин ВИЭВ
Тест-система для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (РБП)
Тест-система для диагностики бруцеллеза животных в кольцевой реакции (КР) с молоком
Тест-система для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и РДСК
Комплемент сухой для реакции связывания комплемента (РСК)
Набор для диагностики инфекционной анемии лошадей в реакции диффузионной преципитации (РДП)
КРС и МРС
Свиньи
Лошади
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ (МЕЛКООПЫТНЫЕ ЖИВОТНЫЕ)
ГЕЛЬ ГИДРООКИСИ АЛЮМИНИЯ
ВОДА СУПЕРОЧИЩЕННАЯ, АПИРОГЕННАЯ
3. Компоненты, входящие в состав набора (антиген, антисыворотка, кислота борная, раствор натрия гидроокиси, агар «Дифко»), расфасованы во флаконы вместимостью 10 см3, герметично укупоренные резиновыми пробками, укрепленными алюминиевыми колпачками. Компоненты, представленные в лиофилизированном виде (антиген, антисыворотка), после добавления дистиллированной воды растворяется в течение 3-5 минут.
4. Флаконы с компонентами, входящими в состав диагностического набора, уложены в коробки пенополистирольные с гнёздами или картонные коробки с разделительными перегородками, обеспечивающими их целостность. В каждую коробку вкладывают инструкцию но применению диагностического набора.
5. Срок годности набора — 24 месяца с даты выпуска при соблюдении условий хранения и транспортирования. По истечении срока годности набор к применению не пригоден.
Антиген и антисыворотку, неиспользованные в день растворения, сохраняют в замороженном состоянии при температуре минус 10 °С до повторного исследования. Повторное замораживание сыворотки не допускается.
6. Диагностический набор транспортируют и хранят в сухом темном месте при температуре от 2 °С до 8 °С.
Допускается транспортирование набора при температуре до 20 °С не более 5 суток.
7. Диагностический набор следует хранить в местах, недоступных для детей.
8. Флаконы с компонентами набора без маркировки, с нарушением целостности и/или герметичности укупорки, с измененным цветом и/или консистенцией, с наличием посторонних примесей, с истекшим сроком годности, бракуют, обеззараживают путем кипячения в течение 30 минут и утилизируют.
Утилизация обеззараженных компонентов диагностического набора не требует соблюдения специальных мер предосторожности.
II. ПРИНЦИП МЕТОДА
9. Антиген (экстракт гомогената селезёнки) содержит внутренний структурный белок вируса с молекулярной массой g 26. Он относится к так называемым растворимым антигенам, способным диффундировать в агаровом геле. Является общим (группоспецифическим антигеном) для всех штаммов вируса инфекционной анемии лошадей (ИНАН).
10. Принцип метода основан на встречной диффузии антител (иммунной сыворотки) и растворимого антигена в агаровом геле. При наличии в исследуемой сыворотке антител гомологичных антигену образуется полоса преципитации.
11. Набор применяют для лабораторной диагностики инфекционной анемии лошадей с целью обнаружения специфических антител в сыворотках крови лошадей больных инфекционной анемией.
12. Специфические антитела появляются в крови животных через 2-6 недель после инфицирования и сохраняются на протяжении длительного времени (более 7 лет).
III. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
13. Диагностический набор применяют для исследования сывороток крови лошадей на выявление антител к вирусу инфекционной анемии при остром, хроническом и латентном течении болезни. Набор рассчитан на исследование 90-120 проб сывороток крови.
14. Антиген и антисыворотка, имеющиеся в наборе, используются в качестве тест-системы «антиген-антитело» при постановке реакции.
15. Перед постановкой реакции сухие антиген и антисыворотку растворяют дистиллированной водой в объёме, указанном на этикетке (приготовленные разведения являются рабочими разведениями). Антиген и антисыворотка должны полностью раствориться в течение 3- 5 минут без образования не разбивающихся при встряхивании хлопьев.
16. Испытуемые сыворотки получают от исследуемых лошадей в количестве не менее 5-6 см3. Их консервируют путём добавления антибиотиков — пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл и хранят при температуре от 4 до 8 °С в течение 10 суток. Сыворотки без консерванта сохраняют в замороженном состоянии.
17. Для приготовления 1% геля агара «Дифко» в стеклянную колбу вместимостью 250- 300 см3 отмеряют 140 см3 воды дистиллированной и, затем, в неё последовательно вносят кислоту борную и раствор натрия гидроокиси 3%. Содержимое колбы перемешивают до полного растворения борной кислоты. Проверяют pH буфера. Буфер должен иметь pH в пределах 8,6±0,1.
В приготовленный боратный буфер вносят агар «Дифко» — 1.5 г. Колбу ставят в баню с водой, воду доводят до кипения и выдерживают в бане до полного рас плавления агара. В чашки Петри диаметром 15 см вносят 15 см3 расплавленного агара, предварительно охладив его до 60 °С. Чашки оставляют на один час с приоткрытыми крышками и дают ему застыть.
18. Контроль качества агара проводят визуально, после его застывания. Слой агара должен быть ровным по всей поверхности чашки, без пузырьков газа. Толщина слоя 3 мм.
После застывания агара приступают к вырезанию лунок. Для этого используют специально изготовленные пробойники из семи жестко закрепленных трубочек диаметром: 7 мм — одна в центре и шесть по окружности на расстоянии 3 мм от центральной и друг от друга.
Агаровые пробки удаляют иглой, пинцетом или канюлей, соединённой с вакуумной установкой. Если в лунках накапливается влага, то её перед внесением реагентов отсасывают пипеткой.
19. Постановка реакции.
Используют две схемы заполнения лунок. Первая — в центральную лунку вносят микропипеткой 0,05-0,06 см3 антигена в три периферические лунки, через одну, закапывают по 0,05-0,06 см3 антисыворотку в рабочих разведениях. Оставшиеся три свободные лунки заполняют с помощью тонко оттянутой пастеровской пипетки исследуемыми сыворотками. При этом: в одной чашке исследуются 12 проб сыворотки.
20. В случае проведения массовых исследований может быть использована вторая схема заполнения лунок, которая позволяет в одной чашке одновременно исследовать 16 проб. В центральную лунку вносят антиген, в две периферические, диаметрально противоположные лунки вносят антисыворотку и оставшиеся четыре лунки — испытуемые сыворотки.
Для каждой пробы сыворотки используют отдельную пастеровскую пипетку. После заполнения лунок чашки Петри закрывают крышками и помещают во влажную камеру при температуре от 18 до 25 °С.
21. Учёт реакции.
Реакцию учитывают через 48-72 часа. Чашки просматривают на тёмном фоне в косо направленном пучке света. Для этой цели используют осветитель ОИ-19 или другой аналогичный прибор.
Оценку реакции делают по контрольной линии преципитации — линии преципитации между контрольными антигеном и антисывороткой. Если она отсутствует или слабо выражена, то исследование необходимо повторить. Контрольные линии преципитации должны быть чёткими, располагаться посредине между лунками с антигеном и сывороткой.
22. Существенный сдвиг контрольных линий преципитации в сторону антигена или сыворотки, а также если она слабо выражена, является показателем слабой активности одного или обоих компонентов набора. В этом случае проводят подтитровку антигена и сыворотки. Для этого сухой препарат антиген или антисыворотку разводят в два раза меньшем объёме дистиллированной воды, затем готовят разведения 1:1,25; 1:1,5; 1:1,75 и проверяют в РДП. За рабочее разведение принимают то разведение компонентов диагностикума, которое даёт чёткие линии преципитации, расположенные посредине между лунками с антигеном и антисывороткой.
23. Оценка результатов реакции:
Отрицательная — контрольные линии продолжаются в сторону лунки с испытуемой сывороткой без изгибов или с небольшим изгибом в сторону контрольной сыворотки.
Положительная:
— между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном образуется полоса преципитации, которая соединяется с контрольной линией;
— линия преципитации отсутствует, но контрольные линии образуют вблизи с испытуемой сывороткой изгиб, направленный в сторону антигена — слабоположительная сыворотка;
— контрольные линии укорачиваются со стороны лунки с испытуемой сывороткой, в отдельных случаях контрольные линии полностью растворяются, что свидетельствует о высоком титре антител. Более различимые линии преципитации будут образовываться, если эти пробы развести 1:4 или 1:8 и повторить реакцию.
Сомнительная — слабый изгиб контрольной линии плохо просматривается, образуются интенсивные неспецифические линии или ореол вокруг лунок, что затрудняет учёт реакции.
От животных, давших сомнительную реакцию, через 2-3 недели берут кровь и исследование повторяют.
Пробы сыворотки, давшие при повторном исследовании отрицательный результат, считают отрицательными.
При получении повторной сомнительной реакции — результат считают положительным.
Неспецифическая преципитация — образуется с некоторыми пробами сыворотки, особенно полученными от старых лошадей. Признаком неспецифической реакции является перекрещивание линий преципитации с контрольными линиями.
В одной и той же пробе сыворотки могут быть специфические и неспецифические антитела.
24. При образовании интенсивного ореола вокруг лунок, затрудняющего учёт реакции, эти пробы сыворотки исследуют повторно, добавив к агару 5% хлористого натрия. Для этого к 150 мл боратного буфера добавляют 7,5 граммов химически чистого хлористого натрия.
25. Жеребят, полученных от положительно реагирующих в РДП кобыл, исследуют после отъёма в возрасте 6-8 месяцев.
26. Результаты учёта реакции регистрируют в специальных журналах, которые должны быть прошнурованы, пронумерованы и скреплены печатью.
КРС и МРС
Вакцина ящурная культуральная моно- и поливалентная эмульгированная инактивированная
Вакцина антирабическая из штамма «Щелково-51» инактивированная жидкая культуральная (Рабиков)
Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма Brucella abortus 75/79-АВ живая сухая
Вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма бруцелла абортус № 82 живая сухая
Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма Brucella abortus 19 живая сухая
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вакцина против некробактериоза животных эмульгированная инактивированная
Вакцина ящурная культуральная моно- и поливалентная сорбированная инактивированная
Свиньи
Вакцина Циркостоп против цирковирусной инфекции свиней инактивированная
Вакцина ящурная культуральная моно- и поливалентная эмульгированная инактивированная
Вакцина против болезни Ауески инактивированная эмульгированная маркированная
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вакцина против рожи свиней из штамма ВР-2 живая сухая
Вакцина живая сухая против сальмонеллеза (паратифа) свиней из штамма ТС-177
Птица
Вакцина ИБК-ЩБК против инфекционного бронхита кур живая сухая
Вирусвакцина против ньюкаслской болезни из штамма «БОР-74 ВГНКИ» сухая
Вирусвакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота» сухая
Домашние животные
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51» для собак и кошек (Рабикан)
Лошади
Вакцина антирабическая из штамма «Щелково-51» инактивированная жидкая культуральная (Рабиков)
Вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма «Щелково-51»
Вирусвакцина против ринопневмонии лошадей и сухая из штамма СВ/69
Диагностические препараты
Бруцеллин ВИЭВ
Тест-система для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (РБП)
Тест-система для диагностики бруцеллеза животных в кольцевой реакции (КР) с молоком
Тест-система для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и РДСК
Комплемент сухой для реакции связывания комплемента (РСК)
Набор для диагностики инфекционной анемии лошадей в реакции диффузионной преципитации (РДП)
КРС и МРС
Свиньи
Лошади
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ (МЕЛКООПЫТНЫЕ ЖИВОТНЫЕ)
ГЕЛЬ ГИДРООКИСИ АЛЮМИНИЯ
ВОДА СУПЕРОЧИЩЕННАЯ, АПИРОГЕННАЯ
Инфекционная анемия — остро или хроническая болезнь однокопытных, характеризующаяся поражением кроветворных органов, рецидивирующей лихорадкой, септическими явлениями, геморрагическим диатезом, анемией с уменьшением содержания гемоглобина и числа эритроцитов, нарушением сердечно-сосудистой системы, упадком сил и длительным вирусоносительством.
Впервые ИНАН описал во Франции Лигаей (1843 г.), Каре и Бале (1904 г.) установили вирусную природу болезни и доказали, что возбудитель содержится в крови и органах больного животного. В России заболевание зарегистрировали в 1910 году и в 1932 году. Я. Е. Коляков с соавторами впервые разработали методы диагностики.
В естественных условиях ИНАН болеют лошади, ослы и мулы. Источником возбудителя инфекции служат больные животные. Лошади с латентным течением болезни могут быть вирусоносителями в течение 10 лет и более. Из организма больных лошадей вирус выделяется с секретами и экскретами, содержащими белок: мочой, калом, носовой слизью, молоком. Факторами передачи служат корма, вода, навоз, подстилка. Основной путь заражения — трансмиссивный через кровососущих насекомых, особенно слепней, в слюне которых вирус сохраняется длительное время. Здоровые лошади могут заболеть ИНАН в результате поступления в организм через кожу даже 0,01 мл зараженной крови. Болезнь чаще регистрируется в летнее время (ярко выраженные сезонность и стационарность).
В последнее время, по данным МЭБ, болезнь встречается в США, Австралии, Японии, Индии, в странах Африки, Европы, а также в странах СНГ и в России.
Коневодство стран, где регистрируют инфекционную анемию, терпит большой экономический ущерб. Летальность при первичных вспышках болезни колеблется от 20% до 80%. Особенно больших расходов требует проведение сложных мероприятий по диагностике, профилактики и ликвидации болезни.
Вирус относится к семейству Retroviridae (от лат. Retro-обратный), роду Lentivirus (от лат. Ltnti — медленный), т. е. включающий в себя медленные вирусы.
Вирус содержит односпиральную РНК, но его геном, в отличие от такового у всех других известных вирусов, диплоиден и представлен двумя идентичными молекулами РНК, соединенными водородными связями. В составе вириона, как у всех ретровирусов, содержится РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза), обеспечивающая синтез ДНК на матрице вирионной РНК. Репликация вирионной нуклеиновой кислоты проходит стадии образования двуспиральной ДНК провируса с интеграцией его с клеточным геномом.
Вирус чувствителен к эфиру, термостабилен, кипячение разрушает его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют через 1-3 часа. В моче, навозе вирус сохраняется до 2,5 месяцев, в инфицированном сене –до 9 месяцев.
Штаммы вируса ИНАН, выделенные в различных частях земного шара в антигенном отношении, идентичны. Общий для них белок сердцевины обнаруживается в РСК, РЗСК и РДП. В то же время гликопротеиды оболочек всегда вариабельны, что в РН и отличает один штамм от другого.
Иммунитет при ИНАН изучен недостаточно. Долгое время затяжной характер течения ИНАН и длительное переживание (персистенция) возбудителя в организме животных объясняли нарушением или снижением иммунной реакции организма на вирус. И лишь исследованиями последних двух десятилетий были обнаружены в сыворотке крови больных лошадей комплементсвязывающие, преципитирующие и вируснейтрализующие антитела. Антитела выявляют в период между 14-120-м днем после заражения, а иногда и на протяжении всей жизни животного. Однако связь между антителами и степенью невосприимчивости лошадей к вирусу выяснена недостаточно. Так, образующие вируснейтрализующие антитела не способны предотвратить рецидивы болезни или нейтрализовать вирус. Установлено, что 99% инфекционного вируса ИНАН, циркулирующего в крови, связано с антителами в виде комплекса антиген-антитело. Вирус ИНАН в процессе длительного персистирования в организме лошади значительно изменяет свои биологические свойства, что ставит под сомнение возможность эффективной вакцинации против этой болезни.
Лечение не разработано. Больные ИНАН животные подлежат убою.
Диагноз на ИНАН ставят комплексно. Учитывают эпизоотические особенности, результаты клинического, патологоморфологического, гематологического, серологического исследований и биологической пробы.
Наиболее информативное, дешевое и имеющее короткие сроки постановки, является серологическое исследование сыворотки крови лошади в реакции диффузионной преципитации (РДП) на ИНАН.
В 1978 году на нашем биокомбинате начали осваивать технологию изготовления набора диагностикумов ИНАН лошадей в РДП под авторским надзором разработчиков: сотрудников ВНИИТИБП- Токарик Б. И. и др., ВГНКИ – Шарабрин О.И., ВИЭВ — Юров К. П. в цехе №2 — нач. цеха Волостных С. И. Отработали технологию получения антигена и антисыворотки и контроль набора.
Испытывали диагностикум ИНАН в широком производственном опыте в областных ветеринарных лабораториях страны.
Первоначально выпускали набор в виде антигена и антисыворотки на 90 или 120 исследований.
В последующем в набор диагностикумов ИНАН в РДП внесли, кроме антигена, 1 флакон, антисыворотки — 3 флакона и агар «Дифко» – 1 флакон 1,5 гр., борную кислоту — 1 флакон 1,6 гр., 1 флакон — 5% гидроокиси натрия — 10 см3 на 90-120 исследований, что позволило стандартизировать постановку реакции во всех лабораториях с применением одних и тех же ингредиентов.
Антиген является группоспецифическим для всех штаммов вируса ИНАН. Принцип постановки реакции основан встречной диффузии антител (иммунной сыворотки) и растворимого антигена в агаровом геле. При наличии в исследуемой сыворотке антител гомологичной антигену образуется полоса преципитации.
Специфические антитела появляются в крови животного через 2-6 недель после заражения и сохраняется на протяжении длительного времени (более 7 лет).
Учет реакции преципитации в агаровом геле проводят через 48-72 часа.
Постановка реакции диффузионной преципитации в агаровом геле очень подробно описана в инструкции по применению и практически не возникают какие-либо вопросы. Наборы диагностикумов ИНАН находятся на рынке более 38 лет и зарекомендовали себя с положительной стороны в целях диагностики ИНАН лошадей. Простота постановки и высокая чувствительность по обнаружению антител в крови животного, в случае его инфицирования вирусом ИНАН, позволяют широко использовать наборы диагностикумов ИНАН лошадей в РФ и странах СНГ.
В случае обнаружения ИНАН лошадей, хозяйство объявляют неблагополучным, на него накладывают карантин и выполняют мероприятия, согласно инструкции по ликвидации ИНАН.
Ограничения с хозяйства снимают после удаления всех положительно реагирующих лошадей, получения двукратного отрицательного результата в РДП с интервалом между исследованиями в 45 дней и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий. Через три месяца проводят однократное контрольное исследование всего поголовья в РДП.
Зенов Н. И. (доктор ветеринарных наук, советник директора по производству ФКП «Щелковский биокомбинат»)
